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　　1、ABI7500熒光定量PCR儀目的條帶很亮，但是邊沿不清楚，前后有拖尾現(xiàn)象。出現(xiàn)這樣的問題，則需要進(jìn)行細(xì)致的分析，因?yàn)橐鹪搯栴}的可能很多。

　　2、可先檢查是否模板質(zhì)量問題，如有降解等，模板應(yīng)避免反復(fù)凍融。也有可能是抽提RNA時(shí)有污染，則需要重新抽提RNA。

　　3、此外，也可能是非特異性擴(kuò)增引發(fā)該問題，可提高退火溫度，少循環(huán)次數(shù)。電泳緩沖液時(shí)間太長，ph值和鹽離子濃度明顯改變、電泳時(shí)電壓太高、電泳液過久沒換，電泳膠臟了等都可能引發(fā)該問題。

　　4、如果不是由上述原因引起，則進(jìn)一步檢查加樣量是否過大，制膠過程中膠孔是否制好，EB是否沖洗干凈、模板中是否混有基因組DNA或蛋白等。也需考慮是否擴(kuò)增的條件不合適。針對(duì)具體原因再采取相應(yīng)的措施。

　　5、PCR產(chǎn)物何時(shí)需要用凝膠純化，何時(shí)不需要？當(dāng)凝膠分析擴(kuò)增產(chǎn)物只有一條帶時(shí)，則不需要使用凝膠純化。當(dāng)可見其他雜帶時(shí)，則可能是積累了大量引物的二聚體，在克隆前需要做凝膠純化。

　　6、如果實(shí)驗(yàn)中沒有回收到目的片段，則需要繼續(xù)進(jìn)行對(duì)照實(shí)驗(yàn)。包括涂布未轉(zhuǎn)化的感受態(tài)細(xì)胞、轉(zhuǎn)化完整質(zhì)粒，計(jì)算菌落生長數(shù)，測(cè)定轉(zhuǎn)化效率、用標(biāo)準(zhǔn)載體，連接對(duì)照，轉(zhuǎn)化高頻率感受態(tài)細(xì)胞，按照的實(shí)驗(yàn)步驟進(jìn)行。

　　7、實(shí)驗(yàn)中出現(xiàn)假陽性擴(kuò)增該怎么辦？這是擴(kuò)增系統(tǒng)受到污染的表現(xiàn)，應(yīng)通過檢查排除污染源。先考慮是否為試劑污染，可將試劑分裝好直接置于PCR儀中擴(kuò)增進(jìn)行判斷。

　　8、其次要考慮是否為實(shí)驗(yàn)室污染，可更換所用的移液器、吸咀管（離心管）等，將試驗(yàn)中的關(guān)鍵步驟轉(zhuǎn)移到一個(gè)新的環(huán)境中，判斷是否為實(shí)驗(yàn)室污染。

　　9、如果是則需要對(duì)整個(gè)實(shí)驗(yàn)室及實(shí)驗(yàn)器材*清洗處理，保持良好的通風(fēng)、清潔等。此外，還要考慮是否為采樣污染，一般表現(xiàn)為一批結(jié)果陽性率很高，一批結(jié)果陽性率又下降很多，如此反復(fù)。解決方法為盡量使用一次試管及吸咀取樣。

　　總結(jié)：ABI7500熒光定量PCR儀的使用注意事項(xiàng)小編就分享到這了，看完本文您就應(yīng)該有了基本的認(rèn)識(shí)和了解相信大家都明白了吧！總的來說，希望對(duì)大家有所幫助。